Wat is die doel van die gebruik van ddNTP's?
Wat is die doel van die gebruik van ddNTP's?

Video: Wat is die doel van die gebruik van ddNTP's?

Video: Wat is die doel van die gebruik van ddNTP's?
Video: 7.1 Секвенирование по Сэнгеру с использованием нуклеотидов дидезоксирибонуклеиновой кислоты (ddNTP) 2024, November
Anonim

DdNTP verwys na Dideoksinukleotiede trifosfate wat in Sanger dideoxy-metode gebruik word om verskillende lengtes DNA-stringe vir DNA-volgordebepaling te produseer. Dit lei tot die beëindiging van DNA-polimerisasie (of DNA-verlenging) proses omdat hierdie proses 'n 3'-OH groep benodig om voort te gaan.

Waarom word ddNTP's daarvan gebruik in volgordebepaling?

Dideoksinukleotiede is kettingverlengende inhibeerders van DNA-polimerase, gebruik word in die Sanger-metode vir DNA volgordebepaling . Die dideoksiribonukleotiede het nie 'n 3'-hidroksielgroep nie, dus kan geen verdere kettingverlenging plaasvind sodra hierdie dideoksinukleotied op die ketting is nie. Dit kan lei tot die beëindiging van die DNA volgorde.

Is ddNTP's eweneens aan dNTP's gekoppel? Een of meer van die dNTP's word radioaktief gemerk om die replikasieprodukte te help visualiseer. Ten slotte kry elke buis een van vier spesiale nukleotiede genoem dideoksinukleotiede ( ddNTP's ). Sodra dit egter geïnkorporeer is, kan DNA-polimerase nie die ketting verder verleng nie, want dit benodig 'n 3'-OH om heg na die volgende nukleotied.

Net so kan 'n mens vra, hoe stop ddNTP's 'n volgordebepalingsreaksie?

Wanneer teenwoordig in klein hoeveelhede in volgorde van reaksies , dideoksiribonukleosiedtrifosfate ( ddNTP's ) beëindig die volgordebepaling reaksie op verskillende posisies in die groeiende DNA-stringe. ddNTP's stop 'n volgordebepalingsreaksie omdat hulle: veroorsaak dat DNS-polimerase van die sjabloonstring afval. c.

Watter tegniek wat dideoksinukleotiede betrek kan gebruik word?

Sanger-volgorde is 'n metode van DNA-volgordebepaling gebaseer op die selektiewe inkorporering van kettingterminering dideoksinukleotiede deur DNA-polimerase tydens in vitro DNA-replikasie. Ontwikkel deur Frederick Sanger en kollegas in 1977, was dit die mees algemene gebruik word volgordebepaling metode vir ongeveer 40 jaar.

Aanbeveel: