Wat gebeur as jy te veel beperkingsensiem byvoeg?
Wat gebeur as jy te veel beperkingsensiem byvoeg?

Video: Wat gebeur as jy te veel beperkingsensiem byvoeg?

Video: Wat gebeur as jy te veel beperkingsensiem byvoeg?
Video: САМО ЗЛО ПРОНИКАЕТ ТУТ ( ЧАСТЬ 3) | EVIL ITSELF PENETRATES HERE ( PART 3 ) 2024, November
Anonim

Onvolledige vertering kan voorkom wanneer te veel of ook min ensiem is gebruik. Die teenwoordigheid van kontaminante in die DNA monster kan inhibeer die ensieme , wat ook onvolledige vertering tot gevolg het. Sommige beperkingsensieme vereis kofaktore vir volle aktiwiteit.

Buitendien, hoekom word beperkingsensieme laaste bygevoeg?

Die beperking ensiem is gewoonlik die laaste komponent bygevoeg tot 'n reaksie om te verseker dat dit nie aan uiterste toestande blootgestel word nie. Die saamgestelde reaksie moet daarna gemeng word ensiem toevoeging. Meng alle oplossings wat bevat beperkingsensieme saggies om te vermy ensiem inaktivering.

Verder, hoe kan restriksie-ensiem vertering verbeter word? Gebruik nie meer as die aanbevole ensiem bedrag (bv. 10 eenhede van ensiem per mikrogram DNA). Verminder die hoeveelheid ensiem in die reaksie, indien nodig. Vermy langdurige inkubasie van die vertering reaksie. Gebruik die aanbevole reaksiebuffer.

Weet ook, hoekom sal 'n beperkingsensiem nie sny nie?

Die voorbereiding van DNA wat gesplit moet word behoort vry wees van kontaminante soos fenol, chloroform, alkohol, EDTA, skoonmaakmiddels of oormatige soute, wat alles kan inmeng met beperking ensiem aktiwiteit. As 'n inhibeerder (dikwels sout, EDTA of fenol) teenwoordig is, sal die kontrole-DNS sny nie na vermenging.

Hoekom kan die hoeveelheid ensiem steraktiwiteit veroorsaak?

Steraktiwiteit is die verslapping of verandering van die spesifisiteit van beperking ensiem bemiddelde klowing van DNA wat kan plaasvind onder reaksietoestande wat aansienlik verskil van dié wat optimaal is vir die ensiem . Steraktiwiteit kan gebeur as gevolg van teenwoordigheid van Mg2+, soos is gesien in HindIII, byvoorbeeld.

Aanbeveel: