INHOUDSOPGAWE:
Video: Hoe plaas jy 'n geen in 'n plasmied?
2024 Outeur: Stanley Ellington | [email protected]. Laas verander: 2024-01-18 08:14
Die basiese stappe is:
- Sny die oop plasmied en "plak" in die geen . Hierdie proses maak staat op beperkingsensieme (wat DNA sny) en DNA-ligase (wat by DNA aansluit).
- Voeg in die plasmied in bakterieë.
- Word baie groot plasmied -dra bakterieë en gebruik dit as "fabrieke" om die proteïen te maak.
Ook, hoe kan 'n geen in 'n plasmied GCSE ingevoeg word?
dit is in 'n plasmied ingevoeg gebruik van ligase ensieme. die plasmied gaan in 'n bakteriese sel. die transgeniese bakterie reproduseer, wat die gevolg is in miljoene identiese bakterieë wat menslike insulien produseer.
Daarbenewens, hoe subkloneer jy 'n geen? Basiese stappe vir Subkloning Jy los en suiwer jou insetsel van die ouervektor, ligeer hierdie insetsel in 'n voorbereide bestemmingsvektor, transformeer hierdie ligasiereaksie in bekwame bakteriële selle. Dan sif jy die getransformeerde selle vir die insetsel.
As u dit in ag neem, wat is die 4 stappe van geenkloning?
In die klassieke beperkingsensiemverterings- en afbindingskloningprotokolle behels kloning van enige DNA-fragment in wese vier stappe:
- isolasie van die DNS van belang (of teiken DNS),
- afbinding,
- transfeksie (of transformasie), en.
- 'n siftings-/keuringsprosedure.
Hoe amplifiseer jy 'n plasmied?
Eksperimentele prosedure
- Begin PCR en suiwer die PCR-produk: Begin PCR om jou insetsel-DNA te versterk.
- Verteer jou DNA:
- Isoleer jou insetsel en vektor deur gel suiwering:
- Lig jou insetsel in jou vektor:
- Transformasie:
- Isoleer die voltooide plasmied:
- Verifieer jou plasmied deur volgorde:
Aanbeveel:
Hoekom word glukose gebruik in plasmied DNA isolasie?
Die doel van hierdie stap is om die beginvolume van selle te verhoog sodat meer plasmied DNA per voorbereiding geïsoleer kan word. Glukose word bygevoeg om die osmotiese druk buite die selle te verhoog. Tris is 'n buffermiddel wat gebruik word om 'n konstante pH (= 8.0) te handhaaf
Wat is 'n plasmied-insetsel?
'n Plasmied is 'n klein, sirkelvormige, dubbelstring-DNS-molekule wat verskil van 'n sel se chromosomale DNA. Navorsers kan DNS-fragmente of gene in 'n plasmiedvektor plaas, wat 'n sogenaamde rekombinante plasmied skep. Hierdie plasmied kan in 'n bakterie ingebring word deur middel van die proses wat transformasie genoem word
Hoe skryf jy 'n geen-betredingsbrief?
Behalwe om duidelik te sê dat die ontvanger van die brief nie op jou eiendom toegelaat word nie, moet jou Geen Betreding-brief die volgende bevat: Die datum waarop die brief in werking tree, die oortreder se naam en die adres van die perseel wat buite perke is. Stuur altyd Geen Betreding-briewe deur gesertifiseerde pos en hou die kwitansie
Hoekom is dit belangrik om die plasmied en die menslike DNA met dieselfde beperkingsensiem te sny?
Hierdie ensieme is belangrik aangesien dit toelaat dat spesifieke gene uit 'n bronchromosoom gesny word. Hulle sny ook bakteriële plasmiede. Die gebruik van dieselfde beperkingsendonuklease-ensiem om die plasmied oop te sny as wat gebruik word om die geen van die chromosoom af te sny, lei daartoe dat komplementêre taai punte geproduseer word
Wat is antibiotika-weerstandsgene in die plasmied?
Weerstandsplasmiede dra per definisie een of meer antibiotika-weerstandsgene. Hulle word dikwels vergesel deur die gene wat vir virulensie-determinante, spesifieke ensieme of weerstand teen giftige swaarmetale kodeer. Veelvuldige weerstandsgene word algemeen in die weerstandskassette gerangskik